STRESZCZENIE: Ekspansja in vitro komórek CD34+ z krwi pępowinowej (KP) jest istotnym klinicznie zagadnieniem w przeszczepach KP, w których obserwuje się mała liczbę komórek hematopoetycznych. Celem pracy była cytometryczna ocena ekspansji komórek CD34+ i CD34+CD38– w zależności od użytego podłoża hodowlanego, czynników wzrostu oraz czasu trwania hodowli. Dodatkowo, oceniono ekspresję receptora CXCR4 na komórkach CD34+ w hodowli. Otrzymane wyniki wskazują, że podłoże StemSpan wzbogacone w SCF, TPO oraz FL jest najlepsze dla ekspansji
komórek CD34+ oraz CD34+ CD38–. Jednocześnie w tych warunkach największy odsetek komórek CD34+ posiada receptor CXCR4. Maksymalną ekspansję komórek CD34+ obserwowano w 6 dniu hodowli, po czym ich liczba stopniowo malała. Ważnym i nowym aspektem pracy jest codzienna analiza fenotypowa komórek, która pozwoliła ustalić optymalny czas trwania hodowli potrzebny do uzyskania maksymalnej liczby komórek CD34+. Procedura hodowli może być użyteczna w dalszych badaniach klinicznych jak również w hodowlach linii hematopoetycznych.

SUMMARY: Expansion of CD34+ cells in vitro is clinically important in cord blood (CB) transplantation, where the stem cells dose is limited. The aim of this study was cytometric analysis of CB CD34+ expansion in several culture conditions. We investigated the effects of media, cytokine combinations and duration of culture on expansion of CD34+ and CD34+CD38– cells. In addition, we studied the expression of CXCR4 receptor on expanded CD34+ cells. Results indicate that Stem- Span supplemented with TPO, SCF and Flt3-ligand is the best medium for expansion of CD34+ and CD34+CD38– cells as well as the persistence of CXCR4 receptor. Under these conditions the ex vivo expansion of CB CD34+ cells occurs primarily during the first 6 days and later on decreases. The unique feature of our study is a daily analysis of phenotype of the cells. Such a strategy allows to estimate the optimal time for expansion of CD34+ cells. Thus, the culture protocol can be useful for further study in clinical use as well as for further second phase expansion of hematological lineages.