Acta Haematologica Polonica, 2002, 33, 3
RYSZARD PACZUSKI
Optymalizacja oznaczania aktywności czynnika von Willebranda za pomocą testu wiązania kolagenu (vWf:CBA)
Optimalisation of measurement of von Willebrand factor activity with collagen binding assay (vWr:CBA)
- SłOWA KLUCZOWE:
- Czynnik von Wilebranda • Test wiązania kolagenu • vWC:CBA
- KEY WORDS:
- von Willebrand Factor • Collagen binding assay • vWC:CBA • Collagen ELISA
STRESZCZENIE: Ostatnio rekomenduje się test wiązania kolagenu (vWC:CBA) jako nową metodę oznaczania aktywności czynnika von Willebranda (vWf). W metodzie tej wykorzystuje się zjawisko wiązania cząstek czynnika von Willebranda przez kolagen a następnie dokonuje pomiaru ilości vWf w sposób analogiczny do procedury stosowanej w oznaczeniach immunoezymatycznych ELISA. Wskazuje się jednak na istnienie dużych trudności w opłaszczaniu mikropłytek kolagenem co wymaga stosowania wysokich stężeń kolagenu i długich czasów inkubacji opłaszczającej lub chemicznej modyfikacji powierzchni mikropłytek ELISA i kolagenu. Prowadzone przez autora badania wskazują, że przyczyną trudności jest niewłaściwy dobór źródła kolagenu i warunków opłaszczania. Ich modyfikacja pozwala na opłaszczanie stosunkowo niskimi stężeniami kolagenu rzędu 5 -10 mg/ml oraz skrócenie do jednego dnia całości testu.
SUMMARY: Collagen binding assay (vWF:CBA) is recently recommended as new method for determination of von Willebrand Factor activity. The principle of this assay is measurement of quantity of von Willebrand Factor molecules bound to collagen in a way similar to ELISA procedure. Most authors report problems in efficient coating of microplates with collagen, and suggest special procedures requiring chemical modification of microplate surface and collagen or high concentration of this protein and long incubation times. Authors studies indicate that the reasons of this problems are origin of collagen used for coating and conditions of coating procedure. Modification of coating conditions allows to use a relatively low concentration of collagen in range 5 -10 mg/ml and to complete the test in one day.






