Acta Haematologica Polonica, 2003, 34, 4
PIOTR GRABARCZYK · EWA BROJER · BARBARA NASIŁOWSKA
Ilościowe badanie DNA CMV techniką real-time PCR: standaryzacja metody i wstępne wyniki u chorych hematologicznych
Quantitative analysis of DNA CMV by real-time PCR: standardization of the method and preliminary results in haematological patients
- SłOWA KLUCZOWE:
- CMV • Real-time PCR • Kinetyka wiremii • Allo BMT
- KEY WORDS:
- CMV • Real-time PCR • Viral-load kinetics • Allo BMT
STRESZCZENIE: W pracy przedstawiono wstępne wyniki badań wykrywania CMV i monitorowania przebiegu zakażenia ilościową metodą real time PCR (r-t PCR). Dokonano badań standaryzacyjnych i przebadano 76 próbek DNA izolowanego z surowicy i pełnej krwi 11 chorych, u których w badaniach uprzednich wykryto DNA CMV metodą "gniazdowego" PCR. We wszystkich próbkach dodatnich wykryto DNA CMV metodą r-t PCR, a jego stężenie wynosiło 99-197 x 103 kopii/ml. DNA CMV w stężeniu 54-727 kopii/ml wykryto także w niektórych próbkach ujemnych pochodzących od tych samych chorych. DNA CMV wykrywano częściej we krwi niż w surowicy. W próbkach surowicy i krwi jednocześnie dodatnich poziom DNA-emii w surowicy i krwi był zbliżony. Poziom DNA-emii w momencie wykrycia zakażenia u różnych chorych był zróżnicowany (od 99 kopii/ml do 126 x 103 kopii/ml), a w trakcie leczenia przeciwwirusowego obserwowano zmiany poziomu DNA-emii. Badanie ilościowe techniką r-t PCR stanowi istotne uzupełnienie jakościowej metody wykrywania DNA CMV i śledzenia dynamiki zakażenia w trakcie leczenia. W pracy zaproponowano algorytm badań DNA CMV po przeszczepieniu szpiku, który umożliwi ustalenie jaki poziom DNA-emii oraz jaka kinetyka zmian poziomu DNA-emii powinna być wskazaniem do rozpoczęcia leczenia.
SUMMARY: Preliminary results of CMV detection and monitoring of infection by quantitative real-time PCR (r-t PCR) are presented in this work. The standarization method was selected and then 78 DNA samples isolated from plasma and whole blood of 11 haematological patients with positive results of "nested" PCR were analysed. In all samples with positive results of "nested" PCR DNA CMV was detected by r-t PCR (concentration: 99-197 x 103 copies/ml). The results of r-t PCR were also positive in some samples with negative results of "nested" PCR, but DNA CMV concentration was low: 54-727 copies/ml. The virus was detected more often in the whole blood than in the serum samples. However, in the samples simultaneously positive, DNA CMV concentration in serum and whole blood was similar. DNA CMV concentration in the initial phase of active infection in different patients varied from 99 copies/ml to 126 x 103 copies/ml. During anti-viral therapy some changes in DNA concentration were observed. Our study confirms that r-t PCR is very useful for CMV detection and quantitation in haematological patients. We propose an algorithm for further studies, which must be done to find out which level of DNA CMV or rate of increase of CMV in blood should be a signal for introduction of antiviral therapy.






